TUNEL染色分析
原理:
對於待檢測的細胞或組織樣品，經過地高辛標記和後續採用多聚體法放大及 DAB 顯色等步驟，即可在普通光學顯 微鏡下觀察到凋亡細胞。
凋亡的特徵是內源性核酸內切酶被啟動，細胞自身的染色質或 DNA 被切割，出現單鏈或雙鏈缺口，並產生與 DNA 中斷點數目相同的 3’-OH末端。
末端去氧核糖核酸轉移酶（Terminal deoxynucleotidyl Transferase ）可以將地高辛標記的 dUTP （DIG-dUTP）標記至 3’-OH 末端，DIG-dUTP 結合在 DNA 中斷點部位，可以通過鼠抗地高辛抗體（Anti-DIG）反應後，隨後以辣根過氧化物酶(HRP)標記的多聚體放大結合結果，最後在 HRP 的催化下通過 DAB 顯色來顯示凋亡細胞，可以通過普通光學顯微鏡檢測到凋亡的細胞。
優點:
(1) 特異性好：TUNEL 檢測時通常更容易標記凋亡細胞，而不容易標記壞死細胞。
(2) 高靈敏度：背景染色極低，陽性染色強，可以在單細胞水準檢測到細胞凋亡，同時由於凋亡早 期就有 DNA斷裂，可以檢測到早期的細胞凋亡。
(3)應用範圍廣：可以用於檢測冷凍或石蠟切片中的細胞凋亡情況。少數細胞凋亡時並沒有 DNA 斷裂，則無法使用本試劑盒。在少數類型的壞死細胞中會因為背景值影響而判斷 TUNEL 檢測呈陽性。
步驟:
1.將石蠟切片玻片脫蠟並用二甲苯和系列酒精溶液水化。
2.使用BioTnA Biotech©（目錄號TAAP01D）的TUNEL凋亡試劑盒進行。
3.在室內用蛋白酶K透化組織溫度10分鐘。
4.用TUNEL封閉緩衝液封閉組織1小時。
5.用TDT反應緩衝液孵育組織10分鐘，
6.然後用TDT酶孵育並在37℃標記溶液各10分鐘。
7.與DIG探針在37℃反應1小時，然後用HRP聚合物處理30分鐘。
8.用DAB底物將組織染色5分鐘，然後用蘇木精複染1分鐘。
9.用酒精將玻片脫水，並用二甲苯清除，然後用封片膠封固玻片。
TUNEL實際染色範例：
※結果觀察
凋亡的細包核呈黃色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。以蘇木素作為背景染色，陰性細胞細胞核呈現淡藍色或紫色。
