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PAS Stain


 

BioTnA Periodic Acid-Schiff staining Kit , PAS stain Kit ( Mucin Stain ) TASS02

過碘酸-席夫 ( Schiff's ) 染色 ( 黏蛋白染色 )

 

 

一、染色原理介紹:

Bio TnA Periodic Acid-Schiff , PAS染色,主要分成兩個原理進行解釋。

過碘酸試劑Periodic Acid reagent :

Periodic acid將醣類的一號碳與二號碳切割(鄰二醇結構vicinal diol structure),使一、二號碳上的氧原子與一、二號碳形成雙鍵形成羰基。(Fig.1) (Malaprade reaction)

 

席夫試劑Schiff’s reagent  :

無色的Schiff's reagent與含羰基化合物以共價鍵結合後以形成紫紅色產物的染色液,而其呈色原理為副玫瑰紅素Pararosaniline與亞硫酸Sulfurous acid處理,形成Schiff's reagent(Pararosaniline leucosulfonic acid)。

Schiff's reagent得製作是通過在中心碳上添加磺酸基團而導致呈色基團Chromophore(Quinoid ring)的破壞,使其變為無色化合物,通過羰基的共價結合將其呈色基團Chromophore上的喹啉環Quinoid ring結構還原,

使結合的醣類呈色為紅色  (Fig.2)。

 

 

Fig.1 Periodic acid (HIO4) reagents used for vicinal diol structure cleavage ,with breakage of the carbon–carbon bond

and formation of carbonyl groups. (Malaprade reaction)

圖一、過碘酸(HIO4)試劑用於裂解鄰二醇結構,使醣類的碳-碳共價鍵斷裂並形成羰基。

(此圖由拓生科技繪製,僅作為參考用)

Fig.2 Loss of the quinoid ring of Pararosaniline in the left diagram (highlighted in red) by the change from double

to single bonds (highlighted in blue) because of the addition of - H2SO3 and the formation of Schiff's reagent.

圖二、左圖副玫瑰紅素的喹啉環(紅色)由於添加了H2SO3後受損,從雙鍵到單鍵(藍色)之變化,形成了Schiff's試劑。

(此圖由拓生科技繪製,僅作為參考用)

 

Fig.3 The single bonds of Schiff's reagent shown in the leftmost diagram (highlighted in blue),  due the addition of

aldehyde reform into a Schiff's reagent thus reduction the quinoid  ring of Pararosaniline(highlighted in red) poduct shown

in the rightmost diagram.

圖三、左圖單鍵Schiff's試劑(藍色)由於添加了醛,因此還原了副玫瑰紅素的喹啉環(紅色)。

(此圖由拓生科技繪製,僅作為參考用)

 

二、染色目標:

黏蛋白Mucin-消化腺peptic gland、腸道intestinal tract、結膜conjunctiva、支氣管腺bronchial glands 等etc.

基底膜Basement membranes、軟骨Cartilage、腦苷Cerebrosides、腎小管Kidney tubules、

    腎透明圓柱體Renal hyaline casts 等etc.

肝醣Glycogen、澱粉Starch等etc.

真菌(細胞壁Cell wall-幾丁質Chitin)Fungal Organisms

 

三、染色應用:

Periodic Acid-Schiff 可以應用於檢查組織真菌性感染Mycoses、腎小管Kidney tubules、薄基底膜疾病Thin basement membrane disease, TBMD、膀胱Bladder、腎臟Kidney、胰臟Pancreas、卵巢Ovary及肺腫瘤Lung tumor等etc.產生之肝醣Glycogen累積。

 

四、呈色結果:

藍色(Hematoxylin )-細胞核Nucleus

紫紅色(Schiff's reagent)-黏蛋白Mucin、肝醣Glycogen、真菌Fungal 等etc.

綠色(Light green)-其他組織 Other tissue

五、BioTnA Periodic Acid-Schiff stain TASS02 實際染色參考:

 

Fig.4 豬腸Pig intestine。PAS/Light Green TASS02染色,杯狀細胞Goblet cells為陽性-紫紅色,呈橢圓空包狀分布

在黏膜上皮或腺窩Crypts 。

Fig.5 豬食道Pig esophagus。Periodic Acid/Light Green TASS02染色,腺體呈陽性-紫紅色。

 

Fig.6 小鼠腎 Mice kidney。 PAS TASS02染色,基底膜Basement membrane 呈陽性-紫紅色;細胞核Nucleus-藍色。

Fig.7 小鼠腸Mice intestine,  PAS TASS02染色,杯狀細胞Goblet cells為陽性-紫紅色,呈橢圓空包狀分布在

黏膜上皮或腺窩Crypts ;細胞核Nucleus-藍色。

 

、BioTnA Periodic Acid-Schiff staining Kit , PAS stain Kit TASS02染色步驟 Protocol

1.烤片 65℃,60分鐘或37℃,overnight。

2.脫蠟,Xylene*2,各10分鐘。(或Xylene*3,各7分鐘)

3.覆水,99.9(100)%*2,95%*1,85%*1,75*1,各2分鐘。

4.自來水沖洗約5分鐘(避免直沖組織),隨後以蒸餾水沖洗。

5.加入Periodic acid 覆蓋過組織,5分鐘。

6.以蒸餾水沖洗。

7.加入Schiff reagent 覆蓋過組織,15分鐘

8.自來水沖洗3分鐘(避免直沖組織)。

9. Counterstain Hematoxylin 5~10秒(依需求可自行調整染色時間)

10.自來水沖洗15分鐘(避免直沖組織),轉色。

11. Light green 染色2分鐘。(選用optional)

12.以蒸餾水快速清洗。(選用optional)

13.玻片以風冷晾乾

14. Xylene膠封片(尚未封片前,須先置入xylene中。若使用Xylene取代劑時須注意封片膠與取代劑是否可互溶)。

※備註:若有染選用optional的項目,請勿以酒精脫水,會把染好的顏色洗掉

 

歡迎加入拓生-生技部(組織病理技術服務)@toson-ihc 

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